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1. 21世纪哺乳动物胚胎生物工程发展趋向

2008, 41 (8): 2425-2430 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.029

摘要（1531）

PDF （330KB）（1000）

动物胚胎生物工程主要是指在实验室条件下，对动物胚胎进行人为干预、改造和操作，按照人们的意愿生产某种性别或特定功能动物的实践。进入21世纪以来，动物胚胎生物工程技术发展迅速，研究不断深入，在动物配子/胚胎超低温冷冻保存、MOET育种、性别鉴定与控制、转基因、克隆和胚胎干细胞分离与培养技术等研究领域取得了令人瞩目的成就，同时也突现了许多新的研究热点和存在的问题。该文围绕哺乳动物配子与胚胎生物工程中几个热点研究进行简述。

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2. 中国荷斯坦牛红毛基因变异及其编码蛋白结构预测

2008, 41 (8): 2431-2435 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.030

摘要（1119）

PDF （384KB）（724）

【目的】通过对中国荷斯坦牛MC1R基因的核苷酸序列分析和蛋白结构预测，探讨中国荷斯坦牛红白花毛色形成的分子机制。【方法】采用PCR-RFLP技术对MC1R基因进行分型，利用生物信息学方法对其蛋白结构特征进行模拟分析。【结果】检测出与毛色表型相关的三种基因型，EE基因型在中国荷斯坦黑白花牛中占优势，ee基因型在中国荷斯坦红白花牛中占优势。蛋白预测结果显示，ee基因型个体的缺失突变使蛋白质翻译提前终止，引发二级结构改变，导致中国荷斯坦牛红白花个体的出现。【结论】E等位基因主要与黑色毛色形成有关，e等位基因主要与红色毛色形成有关。

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3. 大额牛冻精在瘤牛超数排卵中的应用效果及F1代的亲子鉴定

2008, 41 (8): 2436-2441 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.031

摘要（1332）

PDF （419KB）（769）

【目的】本研究旨在探讨大额牛（Bos frontalis）冻精在瘤牛（Bos indicus）体内胚胎生产及杂交改良中的应用前景。【方法】对9头瘤牛（婆罗门牛）供体进行超排，发情后将供体分为试验组（n=5）和对照组（n=4），分别用大额牛和瘤牛（婆罗门牛）冻精人工授精（AI），以第1次AI之日为0天，在第7天回收胚胎；对试验组287号供体左侧子宫角回收胚胎，右侧子宫角使胚胎继续着床妊娠；对287号母牛所产F1代犊牛（大额牛×瘤牛）进行亲子鉴定；测定F1代牛的初生、6月龄和12龄的体重、体尺指标。【结果】试验组和对照组供体的受精率分别是90.5 %和80.8%，头均获胚数分别是4.2±1.3枚和6.5±4.7枚，可用胚数分别是3.0±1.2枚和4.3±5.3枚，可用胚率分别是71.4%和65.4%，两者差异不显著（P＞0.05）；287号母牛左侧子宫角回收到2枚可用胚，右侧子宫角内胚胎继续发育，并成功产下1头母犊，妊娠期为288 d；对F1代犊牛亲子鉴定显示，9个微卫星座位上犊牛与公牛、犊牛与母牛都具有共享的等位基因，父子关系相对机会（RCP）为99.9949%，证明此例亲子鉴定的确是一个三联体家庭，从而证实了种间杂交的真实；F1代牛的初生、6月龄和12月龄重分别为31.5 kg、180.0 kg和280.0 kg；初生～12月龄平均日增重达680.8 g。【结论】大额牛冻精在瘤牛超排中应用效果好；并获得国内首例大额牛（独龙牛）与瘤牛杂种牛犊；F1代牛生长较快，杂种优势明显。

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4. 王不留行主要成分对小鼠乳腺上皮细胞增殖及β-酪蛋白表达的影响

2008, 41 (8): 2442-2447 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.032

摘要（1054）

PDF （392KB）（1024）

【目的】以王不留行为试验材料，寻找王不留行促进泌乳的有效成分，为中药催乳针剂的研发提供理论依据。【方法】对王不留行3类主要成分（皂甙类、黄酮甙类及香豆素类）进行提取，并用化学方法及薄层层析方法予以鉴定。将3种成分分别以不同浓度添加到细胞培养液，采用MTT法检测3类成分对体外培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的作用，运用荧光定量RT-PCR方法对细胞中β-酪蛋白的表达进行检测，用激光共聚焦显微技术对细胞周期蛋白cyclin D1和细胞信号通路中磷酸化stat5因子的表达进行检测，最后通过动物实验进一步验证其有效成分的作用。【结果】王不留行皂甙类成分对小鼠乳腺上皮细胞的增殖有明显的抑制作用（P＜0.05），对小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达无明显作用；王不留行香豆素类成分对小鼠乳腺上皮细胞的增殖和β-酪蛋白的表达均无明显作用；王不留行黄酮甙类成分具有促进泌乳的作用，可通过诱导周期蛋白cyclin D1的表达而促进小鼠乳腺上皮细胞的增殖，并通过激活Jak-stat5信号通路诱导β-酪蛋白基因的表达。【结论】黄酮甙类成分是王不留行促进泌乳的有效成分之一。

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5. TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪脂蛋白酯酶mRNA方法的建立

廉红霞,卢德勋,高民

2008, 41 (5): 1464-1469 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.027

摘要（1124）

PDF （499KB）（1254）

【目的】克隆猪cDNA，作为猪LPL mRNA定量检测的标准品，建立检测方法。【方法】用RT-PCR，从猪背最长肌的总RNA中逆转录扩增LPL的cDNA，将纯化的LPL cDNA与pGM-T载体进行连接,转化宿主菌TOP10，提取重组质粒DNA，PCR鉴定并测序分析,对质粒标准进行实时荧光定量PCR 检测。纯化质粒并检测260 nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。【结果】建立了猪LPL mRNA实时定量PCR检测方法，特异性好，检测灵敏度达103拷贝，线性范围为1×103 ～1×1010拷贝，阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（R2＝0.9871）。【结论】成功克隆了LPL实时荧光PCR定量标准，且TaqMan荧光定量RT-PCR的方法可对猪背最长肌LPL mRNA的表达进行准确定量。

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6. 牦牛乳酸脱氢酶A的分离纯化、酶学性质及其基因的克隆

郑玉才,司晓辉,贺庆华,金素钰,洪键

2008, 41 (5): 1470-1475 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.028

摘要（1199）

PDF （507KB）（947）

【目的】分离纯化牦牛骨骼肌中的乳酸脱氢酶-A（LDH-A），并克隆其cDNA。通过比较牦牛与普通牛的LDH-A的酶学性质和cDNA序列，为研究牦牛适应高海拔、低氧环境，在分子水平上找到一些线索。【方法】采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析等方法，分别从牦牛和普通牛骨骼肌中纯化LDH-A，并对其酶学性质进行比较；通过RT-PCR方法克隆牦牛LDH-A的cDNA序列，并与GenBank登录的普通牛LDH-A的cDNA序列进行比对。【结果】纯化的牦牛LDH-A比活力为103.9 U•mg-1蛋白，纯化倍数为18.2。SDS-PAGE和PAGE分析均显示一条带。酶动力学参数测定显示，牦牛LDH-A的Km NADH为0.097，Km 丙酮酸钠为1.897，均不同程度高于普通牛，其中对丙酮酸钠的Km大约是普通牛的2倍。根据牦牛LDH-A的cDNA序列预测的氨基酸序列与普通牛LDH-A的氨基酸序列比较，只有2个氨基酸残基的改变（257Val-Ala和315Tyr-Cys）。【结论】牦牛LDH-A对丙酮酸的高Km可避免骨骼肌中产生过多的乳酸，是适应进化的结果；这种升高可能与其氨基酸序列变化导致的空间结构微小改变有关。

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7. 用荧光染色法研究山羊瘤胃原虫对细菌吞噬速率的初报

王梦芝,王洪荣,李国祥,曹恒春,卢占军

2008, 41 (5): 1476-1481 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.029

摘要（1404）

PDF （308KB）（1049）

【目的】采用荧光染色标记细菌（fluorescence labeled bacteria，FLB）技术，研究山羊瘤胃中原虫对细菌的吞噬速率。【方法】利用4只装有永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊，采集瘤胃液以获取瘤胃原虫和细菌。试验设置清洗原虫祛除瘤胃自由细菌的荧光全标组（WFLB）及未清洗原虫保留瘤胃自由细菌荧光标记组（FLB）。【结果】WFLB组和FLB组的吞噬速率分别为398.4 cells/(cell•h)和230.4 cells/(cell•h)，换算为细菌N为：2.15 pg N/(cell•h)/和1.24 pg N/(cell•h)。【结论】每天每头羊由原虫在瘤胃内循环中带出的细菌N损失在WFLB组和FLB组分别估计为103.2 mg N/(d•头)、59.5 mg N/(d•头)，或者细菌蛋白损失为0.645 g/(d•头)和0.372 g/(d•头)。结果同时表明，荧光染色标记技术可以应用于瘤胃原虫对细菌吞噬速率的研究。

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8. 海带岩藻聚糖及其级分对体外培养肉鸡巨噬细胞免疫功能的影响

萨仁娜,佟建明,何春年,高微微,张琪

2008, 41 (5): 1482-1488 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.030

摘要（1250）

PDF （374KB）（870）

【目的】通过研究海带岩藻聚糖及其级分对肉鸡巨噬细胞免疫功能的影响，寻找海带提取物调节肉鸡免疫功能的有效级分，为饲料工业科学使用海带资源提供理论依据。【方法】采用水提醇沉的方法，从海带中提取岩藻聚糖，通过纤维柱和凝胶柱层析，对岩藻聚糖进行分级纯化。体外培养肉鸡腹腔巨噬细胞，在培养液中分别加入岩藻聚糖（200 μg•ml-1）和岩藻聚糖5种级分（100 μg•ml-1），采用MTT方法检测细胞存活率，采用ELISA检测细胞因子IL-1和TNF-α，同时测定巨噬细胞的吞噬活性等其它免疫指标。【结果】海带岩藻聚糖及其级分显著提高肉鸡腹腔巨噬细胞的吞噬活性，促进巨噬细胞呼吸爆发、NO的产生量和iNOS活性，促进巨噬细胞分泌IL-1（P＜0.05）；海带岩藻聚糖不同级分对肉鸡巨噬细胞免疫功能的调控作用不同，其中级分Ⅲ和级分Ⅳ的促进作用较强，与对照组相比，可显著提高巨噬细胞的吞噬活性、呼吸爆发、NO产生量和iNOS活性。对其它指标无显著影响（P＞0.05）。【结论】海带岩藻聚糖及其级分可提高体外培养肉鸡腹腔巨噬细胞的免疫功能，不同级分对肉鸡巨噬细胞免疫功能的调控作用不同，其中级分Ⅲ和级分Ⅳ促进巨噬细胞免疫功能的作用最强，是海带岩藻聚糖中的有效级分。

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9. 固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达

李奎,康相涛,刘英,孙桂荣

2008, 41 (5): 1489-1496 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.031

摘要（1098）

PDF （233KB）（881）

【目的】探讨固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达。【方法】应用免疫组织化学技术和Leica 显微图像处理系统，对细胞凋亡基因Fas和FasL在固始鸡免疫器官内的动态表达进行研究。【结果】Fas在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达，但表达量均不相同，呈波浪样动态变化；Fas表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜和细胞质，不表达于细胞核；Fas表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同，呈散在或簇团状分布：法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴小结与淋巴小结之间区域、淋巴小结边缘，淋巴小结内少量淋巴细胞也有Fas表达；胸腺内主要分布于胸腺小叶髓质，极少出现在皮质内；脾脏内主要分布于红髓和边缘区、淋巴小结周围和动脉周围淋巴鞘周围的区域，动脉周围淋巴鞘极少有Fas表达，淋巴小结无Fas表达。FasL在固始鸡免疫器官内的表达与Fas相似，但表达量与Fas相比较少。【结论】细胞凋亡基因Fas和FasL参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控，并对免疫器官的稳定发挥重要作用。

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10. 鸡与鹌鹑属间杂交早期胚胎bcl-2、P53基因表达的差异及发育性变化

乔爱君,李大全,马文霞,廖和荣,李岩,赵宗胜

2008, 41 (5): 1497-1502 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.032

摘要（1214）

PDF （514KB）（718）

【目的】探讨细胞凋亡因子bcl-2、P53对鸡与鹌鹑属间杂交早期胚胎发育的影响。【方法】人工授精获得鸡（♂）与鹌鹑（♀）杂交种蛋，按照鸡标准孵化条件同批入孵，随机采集66、72、78、84、90、96、102、108、114、120 h活胚。采用RT-PCR方法，用Wpkci和β-actin引物进行多重PCR鉴定胚胎样本性别，后选取各时间点雌、雄胚胎各4枚，以β-actin为内标，测定bcl-2、P53的mRNA相对丰度。【结果】（1）雄性胚胎66～114 h bcl-2 mRNA表达维持在较低水平，96 h 有所降低，随后回升到原水平，120 h 极显著升高（P＜0.01），达到峰值；雌性胚胎66～114 h bcl-2 mRNA表达维持在较低水平，114 h 极显著升高（P＜0.01），此后维持在较高水平，120 h 达到峰值。不同日龄之间的比较，114 h雌性表达显著高于雄性（P＜0.05）；（2）雌、雄胚胎P53 mRNA发育性表达模式基本一致。66 h表达水平较高，72 h表达降低，达到低谷，雄性达到显著（P＜0.05），雌性整体差异不显著，随后上升维持在原水平；不同日龄之间表达差异不显著。【结论】114 h雌性胚胎bcl-2 mRNA表达高峰点与其P53 bcl-2表达最低水平相吻合；72 h雌、雄胚胎 P53 mRNA表达与P53 bcl-2表达水平一致，处于低谷点；72、114 h早期杂交胚胎bcl-2、P53基因表达出现异常。

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11. 动物种质资源研究进展

何晓红;关伟军;李奎;文杰;储明星;杜立新;浦亚斌;赵倩君;郭军;马月辉

摘要（196） PDF （511KB）（324）

DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.nykx-200740-3298

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12. 中国瘦肉型猪新品系选育及配套研究回顾与展望

赵克斌，王立贤，程笃学

摘要（210） PDF （483KB）（321）

DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.nykx-200740-3304

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13. 五指山小型猪实验用近交系培育研究成果

冯书堂

摘要（194） PDF （676KB）（533）

DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.nykx-200740-3307

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14. 中国西门塔尔牛新品种选育及高效生产

许尚忠，陈幼春，李俊雅，王雅春，任红艳，高雪

摘要（289） PDF （387KB）（1027）

DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.nykx-200740-3316

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15. 幼畜早期断奶关键技术研究回顾与展望

刁其玉，屠焰

摘要（171） PDF （562KB）（246）

DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.nykx-200740-3325

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16. 植物及微生物畜禽促生长饲料添加剂研究与开发

佟建明

摘要（223） PDF （387KB）（339）

DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.nykx-200740-3331

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